ELISA試劑盒由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
ELISA試劑盒的選型技巧:
1、查找待測樣本的蛋白濃度
可以通過 NCBI 的文獻(xiàn),uniprot,pax-dab 上給出的蛋白表達(dá)量參考值來比較 ELISA 試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致
2、試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測樣本的種類
除試劑盒特別說明外,一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細(xì)胞上清,和細(xì)胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用
3、試劑盒的檢測范圍
也就是標(biāo)曲范圍,特別要注意待測樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi),對于濃度很高的樣本,可以先進(jìn)行預(yù)實驗摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本
4、試劑盒中的稀釋線性及回收率
a. 稀釋線性:一般指樣本稀釋線性,是將樣本梯度稀釋下來,看各稀釋梯度濃度是否成線性;參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的較佳稀釋倍數(shù)
b. 稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況,加標(biāo)稀釋線性是將標(biāo)準(zhǔn)品加入樣本中測定加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度測定是否準(zhǔn)確;同樣也是確定待測樣本稀釋倍數(shù)的參考指標(biāo)。一般線性和回收率的范圍在 80%-120% 比較合適
5、試劑盒的其它指標(biāo)
a. 靈敏度:試劑盒能夠檢測到的樣本較低濃度的能力,如果待檢指標(biāo)含量很低,需要選擇高靈敏度的 ELISA 試劑盒
b. 板間和板內(nèi)的變異系數(shù)(CV%): 反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻,CV% 一般小于 10% 比較好
6、試劑盒的有效期
試劑盒的有效期一般是半年至一年,樣本準(zhǔn)備時間需要考慮到試劑盒的有效期
7、試劑盒的特異性
ELISA 試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分,抗體對有關(guān)。若抗體對中之一為多抗,另一個必須為單抗,建議使用雙單抗
8、重復(fù)性
科學(xué)實驗講求重復(fù)性,一般 ELISA 試劑盒,其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)該控制在 11% 和 15% 以內(nèi)
9、簡便性
試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,實驗時間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。這也不妨作為選擇試劑盒的一個指標(biāo)
10、經(jīng)濟(jì)性
進(jìn)口分裝試劑盒因為省去不少物流和報關(guān)費(fèi)用,與國外*試劑相比價格上有比較大的優(yōu)惠,而且能提供比較靈活的包裝規(guī)格,特別是 48T 等小包裝,目前很多客戶因為對品牌的信任度問題,主要還是選擇國外*,但是國內(nèi)進(jìn)口分裝比較成熟的公司仍然是一個非常好的選擇